Type 2 calreticulin mutations activate ATF6 to promote BCL-xL-mediated survival in myeloproliferative neoplasms.
研究背景
CALR突变是骨髓增生性肿瘤（MPNs）常见突变，常见类型为CALRdel52和CALRins5。二者虽都激活JAK/STAT信号通路，但CALRdel52会激活UPR中IRE1α/XBP1途径，研究人员由此探讨CALRins5是否激活不同UPR途径并依赖其生存。
方法速览
采用细胞系和原代细胞实验，用Ba/F3 - MPL细胞系、原代人CD34 + 细胞、MPN患者样本和CALR突变的骨髓移植模型；进行生物化学分析，用Western Blot、荧光素酶报告基因实验、qPCR和ProteoStat荧光测定法；运用结构建模，用I - TASSER和AlphaFold预测CALR蛋白结构；使用CRISPR - Cas9技术敲除Atf6基因。
主要发现
- ATF6途径特异性激活：Western Blot检测显示CALRins5突变细胞中ATF6活性形式（p50）显著增加，荧光素酶报告基因实验证实其转录活性增强，而CALRdel52突变细胞无此现象。
- 分子伴侣功能丧失：体外分子伴侣实验和ProteoStat荧光测定法表明CALRins5突变蛋白失去分子伴侣功能，结构建模显示其C端干扰分子伴侣功能。
- BCL - xL表达上调：qPCR和Western Blot检测发现CALRins5突变细胞中BCL - xL的mRNA和蛋白水平显著增加，敲除ATF6或用抑制剂处理后表达下降。
- 细胞依赖ATF6生存：CRISPR - Cas9敲除Atf6后，CALRins5突变细胞无细胞因子生长能力下降，Ceapin - A7处理显示细胞对ATF6抑制敏感。
- 潜在治疗靶点：体外和体内实验发现CALRins5突变细胞对BCL - xL抑制剂A - 1331852敏感，联合ruxolitinib和Ceapin - A7处理，细胞存活率显著下降。
总结展望
本研究首次揭示CALRins5突变激活ATF6途径上调BCL - xL表达促进细胞生存的机制，为CALRins5突变MPN治疗提供新靶点。但研究主要基于体外实验和有限动物模型，需更多临床数据验证，且小鼠模型表型温和限制疾病进展研究。