Non-catalytic role of SETD1A promotes gastric cancer cell proliferation through the E2F4-TAF6 axis in the cell cycle.
研究背景
胃癌全球高发且预后差。组蛋白H3K4甲基转移酶家族成员SETD1A在胃癌中异常表达与患者预后不良有关，但它在胃癌细胞增殖中的具体作用及非催化功能未明。本研究旨在探讨其非催化功能在胃癌细胞周期调控中的作用和机制。
方法速览
- 细胞培养：用AGS、SNU719、MKN45等多种胃癌细胞系。
- CRISPR - Cas9敲除：构建doxycycline诱导的Cas9表达系统，通过sgRNA介导SETD1A敲除。
- ChIP - seq和RNA - seq：分析SETD1A结合位点及对基因表达的影响。
- 竞争生长实验：评估SETD1A敲除对细胞增殖的影响。
- 免疫组化：检测临床胃癌组织中SETD1A和TAF6的表达。
主要发现
- SETD1A非催化FLOS域关键：SETD1A缺失抑制三种分子亚型胃癌细胞系增殖，非催化FLOS域对增殖至关重要。
- SETD1A影响E2F靶基因：SETD1A缺失使E2F靶基因表达下降，这些基因与DNA修复和细胞周期调控相关。
- TAF6是关键靶点：CRISPR筛选显示TAF6是SETD1A非催化功能的关键下游靶点，其表达与SETD1A正相关，SETD1A缺失致TAF6水平下降。
- 调控G1/S期转换：TAF6敲除抑制细胞增殖，增加G1期细胞比例；p21缺失部分恢复SETD1A敲除引起的增殖抑制和G1期阻滞。
- E2F4协同促表达：E2F4表达与SETD1A和TAF6正相关，敲除E2F4降低TAF6表达，E2F4与SETD1A在TAF6启动子区域共定位。
总结展望
本研究首次揭示SETD1A非催化FLOS域对胃癌细胞增殖的重要作用，明确TAF6为关键下游靶点，阐明E2F4与SETD1A协同调控机制。不过，研究主要基于体外细胞实验，缺乏体内验证，对SETD1A在其他癌症及免疫细胞和胃癌微环境中的作用待进一步研究。